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如何测定精子穿透能力?

  • 来源:互联网
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  • 2014-11-20
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  1.精子穿透毛细玻璃管试验

  这一试验是由Kremer首先创造并设计了Kremer精子穿透计。其基本原理是采用一根长10cm,内径为0。2-1。2mm的圆柱形毛细玻璃管,管内充满介质,毛细管一端用胶泥封口,另一端插大容量为0。5ml的精液池内,将穿透计置37℃恒温水浴箱中孵育1小时,取出置显微镜下观察并记录精子穿透高度,试验结果的评价标准有二种:

  (1)1小时后观察毛细玻璃管内领先精子到达的高度(mm),以游动的活精子为止点。

  (2)世界卫生组织推荐的方法:评价时间可为10分钟,30分钟,3小时或24小时。评价内容包括:

  1)穿透深度:领先精子的高度(mm)。

  2)穿透密度:选择精子最多的一段毛细管,计算其中的精子数。

  3)活动力:按毛细管上1/3段中精子的前向运动分为0-Ⅲ级。

  0级:无前向运动;

  Ⅰ级:前向运动精子占25%;

  Ⅱ级:前向运动精子占25%-50%;

  Ⅲ级:前向运动精子>50%。

  常用来作穿透试验的介质有以下几种:

  ①正常排卵期宫颈:取材应为婚后近期内有生育史的妇女,身体健康,无生殖系统炎症。粘液的物理正常,粘滞性低,干燥后有羊齿状结晶形成。由于正常排卵期妇女宫颈粘液取材不易,一次用不完的粘液可贮存于试管中,管口用石蜡纸封闭,避免,放入4℃冰箱保存,1周内仍可使用。

  ②动情期母牛宫颈粘液:其来源较人的容易且量多,国外文献报道牛的粘液的物理性状、颜色、拉丝度、弹性等与人相似,干燥后也可见羊齿状结晶,可以代替人的宫颈粘液。在取材时应先消毒牛的外阴,取得的粘液须经物理检查和穿透鉴定后方可使用。牛的宫颈粘液可保存于4℃冰箱,1周内仍可使用。

  ③精子营养液加白蛋白液:NaC17.721g,果糖1g,KH2PO40.136g,MgSO4 0.247g,Na2HPO4 3.581g,加蒸馏水至1000ml,调pH至7.4,存放4℃备用。用时取25%人体血清白蛋白1ml,加入6ml精子营养液混匀后即可使用。也有用150mg牛血清白蛋白溶于5ml精子营养液中做为穿透介质。

  ④鸡蛋清:新鲜鸡蛋黄周围较清稀部分的蛋清也是很好的穿透介质。蛋清的物理性状同排卵期妇女的宫颈粘液相似,透明无色,有粘滞性,内含多种蛋白质及有机物,精子在蛋清介质中穿透自由。

  为保证试验结果的准确可靠,应注意以下几点:精液要求新鲜,禁欲5天,取精液后让其液化,1小时内做穿透试验;穿透介质要新鲜可靠,不可有污染;毛细管顶端装入介质并封闭后应静置10分钟,无气泡后才能使用,因气泡阻止精子前向运动;检测时系统的温度应保持恒温37℃。

  2.精子穿透粘液玻片试验

  这一试验的优点是方法简单,主要用于比较宫颈粘液质量,诊断由于宫颈粘液粘稠所致的不孕,鉴别夫妻间不孕不育的原因,于人工授精时了解受试者粘液性质以及测试粘液质量。

  取一载玻片,将排卵期宫颈粘液一滴滴于载玻片上,在距其4mm处另外滴一滴液化好的精液,用盖玻片轻轻盖上,使两个标本恰好接触,而又不重叠,然后在37℃条件孵育10-15分钟,镜下分析即可。正常情况下,于15分钟即可见有多数精子进入粘液滴内,进入的方式是通过一个领先精子首先突破阻力,其余精子由诊通道循序鱼贯而入,在粘液内自由活动。当精子或粘液任一方有异常时,精子不能通过两个标本液体接触界面进入粘液,而是呈扇形分布。

  3.性交后试验

  本试验是通过观察性交后若干小时内宫颈粘液中活动的精子数,以评价精子功能。试验时首先根据基础体温,宫颈粘液,超声波等项检查确定排卵期,时间应掌握在宫颈粘液将有羊齿状结晶出现时进行。试验前禁欲3天,性交后分别于2、4、6、10小时取宫颈粘液作显微镜检查。用吸管或不带针头的注射器分别吸取阴道后穹窿、宫颈口、宫颈管的粘液标本。

  穹窿部的标本中精子常在2小时后失去活动能力,检查穹窿部标本的目的在于查明精子是否进入阴道。宫颈口标本在正常情况下每高倍视野有20个以上活动力为Ⅱ-Ⅲ级的精子,如果每一视野下出现10个以上Ⅲ级前向直线运动的精子,也可表示正常。宫颈管标本在性交后6-10小时内检查,正常每高倍视野内有10-15个以上活动力在Ⅱ-Ⅲ级的精子,这一段时间是确定精子在宫颈粘液活力及寿命的理想时间。

  宫颈粘液正常,而性交后试验异常者应考虑以下因素:①性交因素:性交方法错误,精液未排入阴道或不射精;②阴道因素:由于症感染或pH改变使排入阴道内的精子失活;③精液因素:少精子症,精液量少,液化不良,或精浆异常引起精子活力下降;④宫颈因素:宫颈管解剖异常,粘连狭窄,子宫颈炎症,感染及宫颈粘液存在精子抗体;⑤其他因素:试验时间不合适,为非排卵期,宫颈粘液黄而稠厚,羊齿状结晶不典型。

  4.精子穿透仓鼠卵试验

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