如何测定精子穿透能力？

　　1．精子穿透毛细玻璃管试验

　　这一试验是由Kremer首先创造并设计了Kremer精子穿透计。其基本原理是采用一根长10cm，内径为0。2-1。2mm的圆柱形毛细玻璃管，管内充满介质，毛细管一端用胶泥封口，另一端插大容量为0。5ml的精液池内，将穿透计置37℃恒温水浴箱中孵育1小时，取出置显微镜下观察并记录精子穿透高度，试验结果的评价标准有二种：

　　（1）1小时后观察毛细玻璃管内领先精子到达的高度（mm），以游动的活精子为止点。

　　（2）世界卫生组织推荐的方法：评价时间可为10分钟，30分钟，3小时或24小时。评价内容包括：

　　1）穿透深度：领先精子的高度（mm）。

　　2）穿透密度：选择精子最多的一段毛细管，计算其中的精子数。

　　3）活动力：按毛细管上1/3段中精子的前向运动分为0-Ⅲ级。

　　0级：无前向运动；

　　Ⅰ级：前向运动精子占25%；

　　Ⅱ级：前向运动精子占25％-50%；

　　Ⅲ级：前向运动精子>50%。

　　常用来作穿透试验的介质有以下几种：

　　①正常排卵期宫颈：取材应为婚后近期内有生育史的妇女，身体健康，无生殖系统炎症。粘液的物理正常，粘滞性低，干燥后有羊齿状结晶形成。由于正常排卵期妇女宫颈粘液取材不易，一次用不完的粘液可贮存于试管中，管口用石蜡纸封闭，避免，放入4℃冰箱保存，1周内仍可使用。

　　②动情期母牛宫颈粘液：其来源较人的容易且量多，国外文献报道牛的粘液的物理性状、颜色、拉丝度、弹性等与人相似，干燥后也可见羊齿状结晶，可以代替人的宫颈粘液。在取材时应先消毒牛的外阴，取得的粘液须经物理检查和穿透鉴定后方可使用。牛的宫颈粘液可保存于4℃冰箱，1周内仍可使用。

　　③精子营养液加白蛋白液：NaC17．721g，果糖1g，KH2PO40．136g，MgSO4　0．247g，Na2HPO4　3．581g，加蒸馏水至1000ml，调pH至7．4，存放4℃备用。用时取25%人体血清白蛋白1ml，加入6ml精子营养液混匀后即可使用。也有用150mg牛血清白蛋白溶于5ml精子营养液中做为穿透介质。

　　④鸡蛋清：新鲜鸡蛋黄周围较清稀部分的蛋清也是很好的穿透介质。蛋清的物理性状同排卵期妇女的宫颈粘液相似，透明无色，有粘滞性，内含多种蛋白质及有机物，精子在蛋清介质中穿透自由。

　　为保证试验结果的准确可靠，应注意以下几点：精液要求新鲜，禁欲5天，取精液后让其液化，1小时内做穿透试验；穿透介质要新鲜可靠，不可有污染；毛细管顶端装入介质并封闭后应静置10分钟，无气泡后才能使用，因气泡阻止精子前向运动；检测时系统的温度应保持恒温37℃。

　　2．精子穿透粘液玻片试验

　　这一试验的优点是方法简单，主要用于比较宫颈粘液质量，诊断由于宫颈粘液粘稠所致的不孕，鉴别夫妻间不孕不育的原因，于人工授精时了解受试者粘液性质以及测试粘液质量。

　　取一载玻片，将排卵期宫颈粘液一滴滴于载玻片上，在距其4mm处另外滴一滴液化好的精液，用盖玻片轻轻盖上，使两个标本恰好接触，而又不重叠，然后在37℃条件孵育10-15分钟，镜下分析即可。正常情况下，于15分钟即可见有多数精子进入粘液滴内，进入的方式是通过一个领先精子首先突破阻力，其余精子由诊通道循序鱼贯而入，在粘液内自由活动。当精子或粘液任一方有异常时，精子不能通过两个标本液体接触界面进入粘液，而是呈扇形分布。

　　3．性交后试验

　　本试验是通过观察性交后若干小时内宫颈粘液中活动的精子数，以评价精子功能。试验时首先根据基础体温，宫颈粘液，超声波等项检查确定排卵期，时间应掌握在宫颈粘液将有羊齿状结晶出现时进行。试验前禁欲3天，性交后分别于2、4、6、10小时取宫颈粘液作显微镜检查。用吸管或不带针头的注射器分别吸取阴道后穹窿、宫颈口、宫颈管的粘液标本。

　　穹窿部的标本中精子常在2小时后失去活动能力，检查穹窿部标本的目的在于查明精子是否进入阴道。宫颈口标本在正常情况下每高倍视野有20个以上活动力为Ⅱ-Ⅲ级的精子，如果每一视野下出现10个以上Ⅲ级前向直线运动的精子，也可表示正常。宫颈管标本在性交后6-10小时内检查，正常每高倍视野内有10-15个以上活动力在Ⅱ-Ⅲ级的精子，这一段时间是确定精子在宫颈粘液活力及寿命的理想时间。

　　宫颈粘液正常，而性交后试验异常者应考虑以下因素：①性交因素：性交方法错误，精液未排入阴道或不射精；②阴道因素：由于症感染或pH改变使排入阴道内的精子失活；③精液因素：少精子症，精液量少，液化不良，或精浆异常引起精子活力下降；④宫颈因素：宫颈管解剖异常，粘连狭窄，子宫颈炎症，感染及宫颈粘液存在精子抗体；⑤其他因素：试验时间不合适，为非排卵期，宫颈粘液黄而稠厚，羊齿状结晶不典型。

　　4．精子穿透仓鼠卵试验